Многие темы, связанные с криоконсервацией репродуктивного материала, освещаются широко и часто. Но есть вопросы, получить подробные ответы на которые в интернете не так уж просто. Один из них — повторная заморозка эмбрионов при ЭКО. Когда актуальна повторная криоконсервация? Можно ли сначала разморозить эмбрионы, а потом снова витрифицировать и поместить в криохранилище? Если да, то не понизит ли это их качество и жизнеспособность? Разбираемся в этой статье.

В каких ситуациях может понадобиться повторно заморозить эмбрионы?

Ситуация первая — когда нужно разморозить эмбрион для криопереноса, а на одном криотопе (носителе для криконсервированного биоматериала) заморожено 2 эмбриона. Эмбриологи размораживают все, иначе никак, при этом переносить предстоит всего один. Встаёт вопрос, что же делать с остальными? Повторная заморозка была бы хорошим решением. На сегодняшний день уже замораживаем по 1 эмбриону на 1 криотопе….

Вторая ситуация — когда пациенты решают провести преимплантационное генетическое тестирование своих замороженных эмбрионов. Допустим, пара не посчитала нужным сделать биопсию всех полученных эмбрионов для проведения ПГТ тестирования на хромосомные аномалии (ПГТ-А). Например, смущали дополнительные затраты на тестирование. Но после двух или трех неудачных переносов супруги решились проверить оставшиеся, чтобы в следующий раз перенести гарантированно здоровый с генетической точки зрения эмбрион, повысив тем самым шансы на имплантацию. Для ПГТ эмбриологам необходимо разморозить эмбрионы пары и провести биопсию — отщипнуть от каждого несколько клеточек для исследования. Биопсийный материал отправляется в генетическую лабораторию, а так как результатов придется ждать, не остается другого выхода как повторная криоконсервация эмбрионов.

Такие ситуации случаются не очень часто, но и редкими их не назовешь. И повторная заморозка действительно становится альтернативой вступления в новый протокол ЭКО со стимуляцией. Она допустима и проводится в эмбриологических лабораториях России и других стран. В криобанке компании «Криотоп» наряду со «свежезамороженными» эмбрионами хранятся и такие, которые прошли через оттаивание и были криоконсервированы снова.

Подробнее про ПГТ-А

Стандартный способ оценки эмбрионов перед переносом и криоконсервацией — визуальный, с помощью мощного микроскопа. Он даёт массу полезной информации опытному эмбриологу, однако не позволяет увидеть хромосомные нарушения. Внешне эмбрион может быть «отличником» по всем параметрам, но если с набором хромосом что-то не так, он не имплантируется. Эмбрионы с хромосомными аномалиями называются «анеуплоидными». Бывает, что беременность после переноса анеуплоидного эмбриона всё-таки наступает, но прерывается. Кроме того, определённые хромосомные сбои приводят к рождению детей с синдромами Дауна, Эдвардса, Патау и других.

Риск анеуплоидии есть в любом возрасте женщины, но после 35 лет он начинает стремительно расти. Переносы эмбрионов с анеуплоидией — частая причина неудач в программах ВРТ. Преимплантационное генетическое тестирование — единственный метод, который позволяет выявить анеуплоидии и отобрать для переноса наиболее здоровых с хромосомной точки зрения эмбрионы.

Как проходит тестирование? Эмбрионам проводится биопсия — специалисты эмбриолаборатории отщипывают от оболочки несколько клеток. Эта процедура безопасна, она не отражается на жизнеспособности эмбриона. Биоптат сразу отправляют генетикам на исследование. Так как проведение исследования требует времени, эмбрионы замораживаются до получения результатов. ПГТ-А с высочайшей точностью выявляет сбои в хромосомном наборе. Получив результаты исследования, репродуктолог проводит перенос заведомо эуплоидных эмбрионов. Тем самым повышаются шансы на достижение беременности.

Оптимально провести биопсию для ПГТ-А сразу после получения эмбрионов, а затем заморозить их на время проведения тестирования. Однако, если для преимплантационной диагностики есть показания, лучше поздно, чем никогда. Неудачные переносы внешне нормальных эмбрионов на качественный эндометрий — как раз одно из показаний. И весомый повод для того, чтобы разморозить хранящиеся в криобанке эмбрионы, а потом заморозить снова.

Как повторная заморозка эмбриона отражается на его качестве?

Как переживают эмбрионы цикл повторной криоконсервации и оттаивания? Не ухудшается ли из-за этого их жизнеспособность, не падают ли шансы на наступление беременности?

Повторная криоконсервация — хотя и не очень распространённая, но достаточно давняя практика. За время её применения проведено немало медицинских исследований, целью которых было оценить влияние ещё одного цикла заморозки-размораживания на выживаемость эмбрионов, вероятность наступления беременности и перинатальные исходы. Отдельные работы показали, что перенос дважды криоконсервированных эмбрионов снижает вероятность успеха программы. Но многие исследования говорят об отсутствии влияния повторного замораживания на исход программы ВРТ.

Так, японское исследование, опубликованное в 2021 году показало, что частота наступления беременности при переносе повторно замороженной и размороженной бластоцисты сопоставима с частотой наступления беременности при переносе бластоцисты, которая замораживалась и размораживалась один раз (The effect of repeated cryopreservation and thawing using cryotip on the clinical outcomes of embryos. Yamato Mizobe, Yukari Kuwatsuru, Yuko Kuroki. Reprod Med Biol. 2021 Jan 23;20(2):176-181).

Правда, есть работы, которые показали, что криоперенос повторно замороженного и размороженного эмбриона несколько снижает вероятность имплантации, не влияя при этом на неонатальные исходы (Effect of repeated cryopreservation on human embryo developmental potential. Xiaoying Zheng, Yuan Chen, Jie Yan, Yuqi Wu. Reprod Biomed Online. 2017 Dec;35(6):627-632).

Конечно, лучше обойтись одним циклом криоконсервации и оттаивания. Повторная заморозка — в какой-то степени крайняя мера. Но перенос таких эмбрионов приводит к беременности и рождению детей — доказано исследованиями. Поэтому, в зависимости от ситуации, такой подход может быть целесообразным.

При этом повторная заморозка возможна только для эмбрионов высокого качества. Важно учитывать и тот факт, что ещё одна криоконсервация может увеличить риск повреждения эмбриона, в результате которого он не перенесёт оттаивания. Однако при точном соблюдении протоколов криоконсервации этот риск минимален. В частности, эмбрионы должны быть заморожены методом витрификации по достижении ими стадии бластоцисты.

Как происходит витрификация эмбрионов?

В ЭКО при лечении бесплодия или в программе отложенного материнства женские яйцеклетки оплодотворяют спермой партнёра или донорской спермой в условиях лаборатории. Затем оплодотворённые яйцеклетки помещаются в специальные среды и инкубаторы, где они превращаются в эмбрионы и развиваются несколько дней. На современном уровне развития репродуктивной медицины оптимальной для переноса в полость матки женщины и криоконсервации считается стадия бластоцисты, которой эмбрионы достигают на 5-6 день развития. На этой стадии эмбриологи, определяя качество эмбриона, могут оценить больше важных параметров и точнее определить его потенциал к имплантации.

Замораживать — неважно, в первый раз или повторно — можно только те бластоцисты, которые получили высокую оценку эмбриологов. Криоконсервация эмбрионов проводится не первый десяток лет. Однако в начале этого века она не была столь эффективной, как сейчас.

Ранее эмбрионы и яйцеклетки криоконсервировали по методике медленного замораживания. Его проблема была в том, что в процессе заморозки в образцах успевали образовываться микрокристаллы льда (эмбрионы и яйцеклетки в отличие от сперматозоидов содержат много жидкости). При оттаивании эти микрокристаллы нередко повреждали хрупкие клетки. Процент «выживаемости» эмбрионов был не настолько высоким, как бы того хотелось врачам и пациентам.

Проблему решило появление и повсеместное внедрение нового метода криоконсервации, который называется «витрификация» (от латинского «vitreous» — «стеклянный», «напоминающий стекло»). Витрификация по сути представляет собой сверхбыструю заморозку, модифицированный подход к криоконсервации. При использовании данного метода на бластоцисты сначала кратковременно воздействуют концентрированным раствором специального криопротектора — благодаря этому происходит «обезвоживание» эмбрионов. Затем образцы помещают в жидкий азот. В результате сверхбыстрого охлаждения биологического материала он переходит в стеклоподобное состояние. Реакции и процессы, происходящие внутри клеток, приостанавливаются, но при оттаивании восстанавливаются в прежнем виде.

Преимущество технологии в том, что микрокристаллы льда не образуются, и риск повреждения эмбриона при оттаивания снижается. Выживаемость эмбрионов, замороженных методом витрификации, составляет 90-98%.

В настоящее время витрификация является золотым стандартом в замораживании эмбрионов, а также яйцеклеток (мужские половые клетки без проблем выдерживают медленную заморозку). Все эмбриологические лаборатории крупных клиник и центров ЭКО витрифицируют эмбрионы.

После витрификации эмбрионы помещают в специальные ёмкости с жидким азотом, где они хранятся при температуре -196 °C. Предельный срок хранения репродуктивного биоматериала не установлен, но известно, что после 10, 15 и даже 20 лет криохранения подсадки размороженных эмбрионов приводят к рождению здоровых детей.

Благодаря высокой эффективности витрификации преимущества заморозки эмбрионов стали ещё более явными.

• После успешной или неудачной попытки ЭКО пациентка может попробовать забеременеть, не подвергая организм гормональной нагрузке, связанной со стимуляцией яичников.
  
  
• То же самое — с пункцией фолликулов для забора яйцеклеток. Её не надо делать, ведь эмбрионы уже есть.
  
  
• Возможность заморозить эмбрионы позволяет отложить перенос на любой срок. Это может быть актуально, если необходимо восстановить цикл после гормональной стимуляции, подготовить эндометрий к имплантации. Опять же, случаются форс-мажорные обстоятельства.
  
  
• Перед криопереносом мужчине не надо проходить обязательное обследование, как перед «свежим» циклом.
  
  
• В программах сохранения фертильности замороженные эмбрионы дают более высокие шансы на достижение беременности, чем замороженные ооциты. Здесь стоит дать статистику на базе чего мы делаем такие выводы
  
  
• Криоконсервация бластоцист — оптимальное решение для сложившейся пары, которая пока не готова стать родителями, но планирует это на будущее.
  
  

Только витрификация может использоваться при повторной заморозке бластоцист — этот повышает вероятность, что эмбрион благополучно переживет криоконсервацию и последующее размораживание.